緒論
0.1 基因工程的誕生及其發(fā)展史
0 .1 .1 基因工程產(chǎn)生的基礎(chǔ)
0 .1 .2 基因工程的誕生
0 .1 .3 基因工程的快速發(fā)展
0.2 基因工程的研究內(nèi)容及其應(yīng)用
0 .2 .1 基因工程的研究內(nèi)容
0 .2 .2 基因工程的應(yīng)用
0.3 基因工程的安全性
0 .3 .1 基因工程早期的安全性爭論
0 .3 .2 基因工程的安全性問題
0 ．3 ．3 基因工程技術(shù)應(yīng)用的安全管理
思考題
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附基因工程安全管理辦法
第1章基因工程的基礎(chǔ)知識與基本技術(shù)
1.1 基因工程的基礎(chǔ)知識
1 .1 .1 基因的結(jié)構(gòu)特點
1 .1 .2 從DNA 到蛋白質(zhì)
1 .1 .3 基因研究進展
1.2 基因工程的基本技術(shù)
1 .2 .1 電泳技術(shù)
1 .2 .2 PCR 技術(shù)
1 .2 .3 分子雜交
1 .2 .4 DNA 序列分析
1 .2 .5 基因突變技術(shù)
思考題
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第2章基因操作的工具酶
2.1 限制性核酸內(nèi)切酶
2 .1 .1 寄主控制的限制與修飾作用
2 .1 .2 限制性核酸內(nèi)切酶的分類與命名
2 .1 .3 �、� 型限制酶的特性與DNA 的切割
2 .1 .4 影響限制性核酸內(nèi)切酶活性的因素
2.2 DNA 連接酶類
2 .2 .1 DNA 連接酶
2 .2 .2 連接酶對DNA 分子的連接作用
2 .2 .3 影響連接反應(yīng)的因素
2.3 DNA 聚合酶類
2 .3 .1 大腸埃細(xì)菌DNA 聚合酶Ⅰ
2 .3 .2 Klenow 聚合酶
2 .3 .3 T4DNA 聚合酶
2 .3 .4 T7DNA 聚合酶
2 .3 .5 Taq DNA 聚合酶
2 .3 .6 逆轉(zhuǎn)錄酶
2.4 修飾酶類
2 .4 .1 S1 核酸酶
2 .4 .2 堿性磷酸酶
2 .4 .3 T4 多核苷酸激酶
2 .4 .4 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶
思考題
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第3章基因克隆的載體
3.1 質(zhì)粒載體
3 .1 .1 質(zhì)粒的生物學(xué)特性
3 .1 .2 理想質(zhì)粒載體構(gòu)建的基本原理和方法
3 .1 .3 大腸埃細(xì)菌的幾種克隆載體的構(gòu)建
3.2 噬菌體載體
3 .2 .1 噬菌體的生物學(xué)特性
3 .2 .2 λ 噬菌體載體的構(gòu)建
3 .2 .3 λ 噬菌體載體的類型
3.3 柯斯質(zhì)粒載體
3 .3 .1 柯斯質(zhì)粒載體的組成
3 .3 .2 柯斯質(zhì)粒載體的特性
3 .3 .3 使用柯斯質(zhì)粒克隆載體的基本程序
3.4 單鏈DNA噬菌體(M13噬菌體)克隆載體
3 .4 .1 M13 噬菌體的生物學(xué)特性
3 .4 .2 構(gòu)建M13 噬菌體克隆載體的策略和途徑
3 .4 .3 M13 克隆載體的應(yīng)用
3.5 噬菌粒載體
3 .5 .1 噬菌粒載體的概念
3 .5 .2 pUC118 和pUC119 噬菌粒載體
3.6 人工染色體克隆載體
3 .6 .1 人工染色體克隆載體的含義和特點
3 .6 .2 酵母人工染色體克隆載體的構(gòu)建
3 .6 .3 細(xì)菌人工染色體的構(gòu)建
3 .6 .4 哺乳動物人工染色體
3 .6 .5 人工染色體克隆載體的應(yīng)用
思考題
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第4章DNA分子克隆
4.1 基因克隆方案
4 .1 .1 含目的基因的DNA 片段獲得
4 .1 .2 載體與目的DNA 片段的體外重組
4 .1 .3 重組DNA 分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞
4 .1 .4 重組子的篩選
4.2 重組體的構(gòu)建
4 .2 .1 黏末端連接
4 .2 .2 平末端連接
4 .2 .3 修飾黏末端連接
4 .2 .4 連接條件的優(yōu)化
4 .2 .5 重組體構(gòu)建的修飾
4.3 重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞
4 .3 .1 重組DNA 分子的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染
4 .3 .2 重組體的體外包裝及λ 噬菌體的轉(zhuǎn)導(dǎo)
4 .3 .3 直接轉(zhuǎn)化技術(shù)
4.4 重組體克隆的篩選與鑒定
4 .4 .1 表型特征篩選(遺傳檢測法)
4 .4 .2 菌落(噬菌斑)原位雜交篩選
4 .4 .3 免疫學(xué)方法篩選
4 .4 .4 結(jié)構(gòu)分析篩選
4 .4 .5 轉(zhuǎn)譯篩選
思考題
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第5章目的基因的獲取
5.1 化學(xué)合成法獲得目的基因
5 .1 .1 亞磷酸三酯法
5 .1 .2 基因的組裝
5.2 PCR 技術(shù)獲取目的基因
5 .2 .1 反轉(zhuǎn)錄PCR
5 .2 .2 依據(jù)基因部分序列信息獲得基因全長序列
5.3 篩選基因文庫獲取目的基因
5 .3 .1 基因文庫的構(gòu)建
5 .3 .2 cDNA 文庫的構(gòu)建
5 .3 .3 篩選基因文庫獲取目的基因
5.4 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法獲得目的基因
5 .4 .1 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法的基本原理
5 .4 .2 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法的應(yīng)用
5.5 圖位克隆獲得目的基因
5 .5 .1 染色體步移
5 .5 .2 染色體登陸
5.6 mRNA差別顯示技術(shù)獲得差異表達的基因
5 .6 .1 mRNA 差別顯示技術(shù)原理
5 .6 .2 mRNA 差別顯示技術(shù)的應(yīng)用分析
5.7 酵母雙雜交系統(tǒng)分離目的基因
5 .7 .1 酵母雙雜交技術(shù)的基本原理
5 .7 .2 酵母雙雜交系統(tǒng)的組成成分
5 .7 .3 酵母雙雜交技術(shù)的實驗程序
5.8 生物信息技術(shù)分離和鑒定目的基因
5 .8 .1 利用EST 數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)新基因
5 .8 .2 通過蛋白家族的保守性分離目的基因
5.9 獲取目的基因方法的選擇策略
思考題
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第6章克隆基因的表達
6.1 克隆基因表達的基本規(guī)律
6 .1 .1 克隆基因表達的過程
6 .1 .2 克隆基因表達的調(diào)控元件
6.2 克隆基因的表達系統(tǒng)
6 .2 .1 大腸埃細(xì)菌表達系統(tǒng)
6 .2 .2 酵母表達系統(tǒng)
6.3 克隆基因高效表達的策略
6.3.1 影響克隆基因表達的因素
6.3.2 大腸埃細(xì)菌高效表達外源基因的策略
6.3.3 克隆基因表達產(chǎn)物的利用
思考題
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第7章基因工程相關(guān)技術(shù)
7.1 基因信息分析技術(shù)
7 .1 .1 核酸序列的檢索
7 .1 .2 核酸序列的基本分析
7 .1 .3 基因的電子表達譜分析
7 .1 .4 核酸序列的電子基因定位分析
7 .1 .5 基于核酸序列比對分析的功能預(yù)測
7 .1 .6 cDNA 序列的開放讀碼框分析
7 .1 .7 引物設(shè)計
7.2 基因芯片技術(shù)
7 .2 .1 基因芯片的技術(shù)原理
7 .2 .2 基因芯片的制備
7 .2 .3 靶序列的標(biāo)記和雜交
7 .2 .4 基因芯片的應(yīng)用
思考題
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第8章轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)簡介
8.1 轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)
8 .1 .1 植物基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)
8 .1 .2 轉(zhuǎn)基因植物的篩選與檢測
8 .1 .3 植物基因工程表達載體的改進和優(yōu)化
8 .1 .4 植物基因工程應(yīng)用
8.2 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)
8 .2 .1 培育轉(zhuǎn)基因動物的基本操作過程
8 .2 .2 外源基因?qū)雱游锛?xì)胞的方法
8 .2 .3 轉(zhuǎn)基因動物的研究成果及應(yīng)用
8.3 桿狀病毒與昆蟲細(xì)胞表達系統(tǒng)
8 .3 .1 桿狀病毒的分子生物學(xué)特性
8 .3 .2 桿狀病毒表達系統(tǒng)的優(yōu)點
8 .3 .3 桿狀病毒載體
8 .3 .4 昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞表達系統(tǒng)在外源蛋白生產(chǎn)上的應(yīng)用
8 .3 .5 利用蟲體生產(chǎn)重組蛋白
8.4 藍(lán)藻基因工程
8 .4 .1 藍(lán)藻基因工程的概況
8 .4 .2 藍(lán)藻基因工程的載體構(gòu)建
8 .4 .3 藍(lán)藻遺傳轉(zhuǎn)化
8 .4 .4 用作外源基因表達的宿主藍(lán)藻
8 .4 .5 基因篩選與檢測
8 .4 .6 藍(lán)藻基因工程的應(yīng)用
思考題
推薦參考書
參考文獻
英文專業(yè)名詞索引
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