《微生物生理學(xué)實驗教程》共4章，30個實驗。主要介紹研究微生物細(xì)胞化學(xué)成分、微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)、微生物代謝與微生物代謝調(diào)控的實驗技術(shù)和方法�！段⑸锷韺W(xué)實驗教程》選取的實驗材料包括細(xì)菌、古菌、絲狀真菌和酵母菌，生理類型包括白養(yǎng)型、異養(yǎng)型及光能營養(yǎng)型，實驗技術(shù)則融合了微生物學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、生物物理學(xué)、分子生物學(xué)、生物信息學(xué)等學(xué)科的研究技術(shù)和方法，力求綜合分析和探討微生物生命活動規(guī)律�！段⑸锷韺W(xué)實驗教程》選編的實驗力求體現(xiàn)教材的基礎(chǔ)性、代表性、實用性和先進(jìn)性�！段⑸锷韺W(xué)實驗教程》對每個實驗的實驗原珥都作了較詳細(xì)的論述，實驗步驟清晰，每個實驗都有思考題和參考文獻(xiàn)。
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目錄
總序
前言
第一章 微生物細(xì)胞化學(xué)成分的分析 1
實驗一 細(xì)菌細(xì)胞含水量與蛋白質(zhì)含量的測定 1
實驗二 細(xì)菌胞內(nèi)輔酶I和輔酶Ⅱ濃度水平的檢測 10
實驗三 酵母菌細(xì)胞RNA提取與地衣酚測定法 15
實驗四 法夫酵母菌細(xì)胞蝦青素的提取及測定 20
實驗五 極端嗜鹽菌甘油二醚類衍生物的檢測 26
實驗六 真菌細(xì)胞中多糖成分的提取及單糖組分的測定 32
第二章 微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分析 39
實驗七 絲狀真菌線粒體的提取及檢測 39
實驗八 酵母菌細(xì)胞壁的制備及多糖組分的檢測 44
實驗九 極端嗜鹽菌紫膜的分離和提取 51
實驗十 革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的分離和純化 58
第三章 微生物代謝的分析 61
實驗十一 翻轉(zhuǎn)膜法測定細(xì)菌中的單價陽離子逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性 61
實驗十二 根瘤菌接種豆科植物實驗 67
實驗十三 豆科植物-根瘤菌共生體有效性測定 71
實驗十四 反硝化細(xì)菌的培養(yǎng)及異化型硝酸鹽還原作用的檢測 74
實驗十五 光合細(xì)菌的分離與純化 81
實驗十六 化能白養(yǎng)菌的分離與純化 88
實驗十七 微生物呼吸的測定 96
實驗十八 乳酸發(fā)酵與乳酸菌飲料 102
實驗十九 酒精發(fā)酵 107
實驗二十 大腸桿菌細(xì)胞各組分中鐵還原酶活性的檢測 109
實驗二十一 絲狀真菌原生質(zhì)體制備、融合及再生 114
實驗二十二 細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)金屬離子動態(tài)平衡的檢測 119
實驗二十三 葡萄糖苷酶BglB在大腸桿菌中的異源表達(dá)、純化 124
實驗二十四 長側(cè)翼同源區(qū)-PCR法敲除枯草芽孢桿菌的目的基因 133
實驗二十五 環(huán)境樣品宏基因組文庫構(gòu)建及功能基因的篩選 139
實驗二十六 易錯PCR致突變的反應(yīng)體系設(shè)計與實驗 149
第四章 微生物代謝調(diào)控的分析 156
實驗二十七 深紅紅螺菌固氮酶合成和活性的調(diào)控及測定 156
實驗二十八 培養(yǎng)條件對重組大腸桿菌生長及聚羥基烷酸產(chǎn)量和組成的影響 163
實驗二十九 大腸桿菌p-半乳糖苷酶的誘導(dǎo)合成和分解代謝物阻遏 169
實驗三十 不同培養(yǎng)條件下細(xì)菌目的基因轉(zhuǎn)錄水平差異的分析 174
附錄l 微生物細(xì)胞的收集和處理方法 180
附錄2 利用KEGG數(shù)據(jù)庫查詢代謝途徑信息簡介 182
附錄3 常見的市售酸堿的濃度 188
附錄4 微生物生理學(xué)實驗中常用的緩沖液和儲存液的配制 189
附錄5 極端嗜鹽菌的種類及生理特征 192
附錄6 離心機(jī)的轉(zhuǎn)速、相對離心力和半徑之間的換算關(guān)系 194
附錄7 酸奶的檢查指標(biāo) 195
附錄8 網(wǎng)篩的目數(shù)與孔徑的關(guān)系 196
附錄9 微生物的平板菌落計數(shù)法 197
附錄10 微生物顯微鏡直接計數(shù)法 198
圖版
第一章微生物細(xì)胞化學(xué)成分的分析
微生物細(xì)胞化學(xué)成分的分析是研究微生物生命活動的基礎(chǔ)。本章介紹分析微生物細(xì)胞化學(xué)組成的方法，包括微生物細(xì)胞含水量、蛋白質(zhì)、核糖核酸、糖類含量的則定方法，反映細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)氧化還原水平n勺輔酶I和輔酶II濃度的檢測方法，極端耆鹽菌細(xì)胞膜的獨特成分甘汕二醚類的分析技術(shù)和次級代謝產(chǎn)物蝦青素的提取及則定。
實驗一細(xì)菌細(xì)胞含水量與蛋白質(zhì)含量的測定
一、實驗?zāi)康?br />
1．掌握測定細(xì)菌細(xì)胞干重及含水量的原理及方法。
2．了解幾種常用的測定蛋H質(zhì)含量i向方法，掌握福林一酚法和考馬斯亮藍(lán)染色法測定細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)含最的原理及實驗技術(shù)。
二、實驗原理
（一）細(xì)菌細(xì)胞干重和含水量的測定
在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的微生物細(xì)胞，經(jīng)過濾或離心收集斤，洗滌除去附在細(xì)胞表面的培養(yǎng)基，再離心收集細(xì)胞，≥i：盡量除去細(xì)胞所附著的水分，稱得的質(zhì)量為細(xì)抱的鮮重(wet weight)，常以g/L表示。為了防止細(xì)胞吸水漲裂，洗滌細(xì)胞常用與細(xì)抱基本等滲的緩沖液。由于細(xì)胞在收集過程中會聚集成團(tuán)，細(xì)胞之問的水分難以除去，岡此，用上述方法測得的細(xì)胞鮮重常常比實際的鮮重要高（一般高出10%左右）。弛胞之問的水分可用加入同位素標(biāo)記蛋白質(zhì)測定，由蛋白質(zhì)不能進(jìn)入細(xì)胞，只能溶于細(xì)胞外圍的水中，因此測定細(xì)胞團(tuán)的放射活性，可推算出細(xì)胞外圍的水量。
取一定量的鮮細(xì)胞，105～110℃干燥16 --24 h后稱量，再重復(fù)兒次，稱至恒重，得到細(xì)胞的干重（dry weight）。微生物細(xì)胞f向干重就是微生物的生物量(biomass)，是測量微生物生長的重要指標(biāo)，常用每升含有微生物的質(zhì)量（單位g/L）表示。105～110℃足以揮發(fā)掉大分子通過水合作用所結(jié)合的水，更高的溫度會引起某些大分子的玻壞并導(dǎo)致一些細(xì)胞其他成分的揮發(fā)。此外，高溫也會引起細(xì)胞懸液沸騰，將物質(zhì)濺出容器，而使結(jié)果偏低。
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