《食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)/食品科學(xué)與工程系列教材》以微生物學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)為出發(fā)點(diǎn),以微生物學(xué)和食品加工過(guò)程中所涉及的微生物為核心,匯編了研究和生產(chǎn)中經(jīng)常涉及的實(shí)驗(yàn)技術(shù),具有內(nèi)容廣泛、選材結(jié)合實(shí)際、方法先進(jìn)的特點(diǎn)。《食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)/食品科學(xué)與工程系列教材》主要包括6個(gè)方面的內(nèi)容:第1篇,微生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù);第2篇,微生物生理生化實(shí)驗(yàn)技術(shù);第3篇,發(fā)酵食品微生物學(xué)技術(shù);第4篇,食品安全微生物學(xué)技術(shù);第5篇,微生物育種與分子生物學(xué)技術(shù);第6篇,食用與藥用真菌實(shí)驗(yàn)技術(shù)。書后還附錄了微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用培養(yǎng)基配方、常用試劑配方等,便于讀者使用。
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《食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)/食品科學(xué)與工程系列教材》:
實(shí)驗(yàn)1-2環(huán)境中的微生物檢測(cè)及菌落特征觀察
一、目的要求
了解環(huán)境中各類微生物的存在,并比較不同環(huán)境中微生物的數(shù)量和種類;理解微生物實(shí)驗(yàn)無(wú)菌操作技術(shù)的重要性;初步認(rèn)識(shí)各類微生物的菌落特征。
二、實(shí)驗(yàn)原理
微生物在環(huán)境中廣泛存在,但由于其個(gè)體微小,絕大部分用肉眼無(wú)法觀察到。人工制備的培養(yǎng)基中含有微生物生長(zhǎng)所需要的各種營(yíng)養(yǎng)成分,將取自不同來(lái)源的樣品接種于培養(yǎng)基上,并在適宜的溫度條件下培養(yǎng),則微生物細(xì)胞能夠通過(guò)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的群體,即菌落。不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有不同的要求,實(shí)驗(yàn)室一般用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基)進(jìn)行細(xì)菌的培養(yǎng),而馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)一般用于真菌的培養(yǎng)。不同微生物形成的菌落也有其各自的特征,如菌落的大小、表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑,邊緣整齊或不整齊,菌落透明或半透明或不透明、顏色及質(zhì)地疏松或緊密等。因此,可通過(guò)選用營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板來(lái)分別檢測(cè)環(huán)境中的細(xì)菌和真菌等微生物的數(shù)量和種類。
三、實(shí)驗(yàn)材料
。1)培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,馬鈴薯蔗糖瓊脂平板。
。2)儀器及其他用品:高壓蒸汽滅菌鍋,培養(yǎng)箱,棉簽(裝在試管或小玻璃瓶中滅菌后備用),試管架,記號(hào)筆,酒精燈,無(wú)菌水(裝在試管中備用),廢物缸等。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板各5副,其中各一副作為對(duì)照不做任何處理,其余各4副分別按如下方法處理。
1.空氣中微生物的檢測(cè)
取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板各一副;打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋,在空氣中暴露約10min后蓋上;用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿的底部做好標(biāo)記,將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4d。
2.實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上微生物的檢測(cè)
。1)取棉簽:左手拿裝有棉簽的試管,在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指夾持并拔出棉塞(或試管帽);將試管口在酒精燈(或煤氣燈)火焰上稍作燒灼;傾斜試管,用右手拇指和食指小心地取出一根棉簽;燒灼管口,塞回棉塞(或試管帽),將試管放回試管架。
。2)弄濕棉簽:左手取無(wú)菌水試管,同上方法拔出棉塞(或試管帽)并燒灼試管口;將棉簽插入水中,再提出水面并在管壁上擠壓一下以除去過(guò)多的水分;小心取出棉簽,燒灼管口,塞回棉塞(或試管帽),并將試管放回試管架。
。3)取樣:將濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上約2cm2的范圍內(nèi)來(lái)回擦拭數(shù)次(圖1-2A),以吸附臺(tái)面上的微生物。
。4)接種:取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板一副,在火焰旁用左手拇指和食指使培養(yǎng)皿開(kāi)啟一條縫;將棉簽伸入并在培養(yǎng)基表面來(lái)回擦拭接種(圖1-2B),注意不要將培養(yǎng)基擦破;立即閉合皿蓋,將用過(guò)的棉簽丟棄至廢物缸中;在培養(yǎng)皿底部用記號(hào)筆做好標(biāo)記。
圖1-2實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或皮膚表面微生物的取樣與接種方法
A.用濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或皮膚表面來(lái)回擦拭,以粘取微生物;B.將濕棉簽在平板培養(yǎng)基的表面來(lái)回涂抹,
使粘取的微生物轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上
。5)培養(yǎng):將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4d。
采用同樣的方法取樣并接種PDA平板,做好標(biāo)記后將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4d。
3.人體皮膚表面微生物的檢測(cè)
采用上述方法,另取無(wú)菌棉簽并弄濕,然后將濕棉簽在自己手臂或耳根等處的皮膚表面約2cm2的范圍內(nèi)來(lái)回擦拭數(shù)次,并接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板。做好標(biāo)記后將培養(yǎng)皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4d。
4.自來(lái)水中微生物的檢測(cè)
采用上述方法,另取無(wú)菌棉簽,但無(wú)需用無(wú)菌水弄濕,而是直接蘸取少量自來(lái)水;然后將蘸有自來(lái)水的濕棉簽在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板的表面來(lái)回擦拭接種。做好標(biāo)記后將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4d。
五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
培養(yǎng)3~4d后,用相機(jī)拍攝各個(gè)平板的照片,并填寫表1-2。
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