《基因工程實驗》包括18個實驗，分別是基因組DNA的提取、總RNA和mRNA的提取、質粒DNA的提取、目的基因的獲得、限制性內切酶的酶切反應、凝膠電泳法進行DNA的分離和純化、DNA片段的體外連接、大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備、重組子的轉化、菌落PCR篩選陽性重組子、重組質粒的酶切鑒定、外源基因在大腸桿菌中的誘導表達、基因表達產(chǎn)物的檢測分析、Western.Blotting實驗、Southern印跡實驗、全長DNA文庫的構建、凝膠阻滯實驗和染色質免疫共沉淀技術。
《基因工程實驗》內容清晰準確、簡明扼要，便于指導操作。可作為綜合性大學、師范和農(nóng)林院校生物工程、生物技術、生物制藥等專業(yè)基因工程實驗指導用書。
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目錄
前言
實驗1 基因組DNA的提取 1
實驗1.1 植物基因組DNA的提取 2
實驗1.2 動物基因組DNA的提取 3
實驗1.3 細菌基因組DNA的提取 4
實驗1.4 酵母菌基因組DNA的提取 5
實驗2 總RNA和mRNA的提取 8
實驗2.1 Trizol法提取總RNA 9
實驗2.2 異硫氰酸胍/酚一步法提取總RNA 10
實驗2.3 總RNA提取試劑盒 11
實驗2.4 mRNA的分離純化 12
實驗3 質粒DNA的提取 15
實驗3.1 堿裂解法少量提取質粒DNA 17
實驗3.2 少量質粒提取試劑盒 19
實驗4 目的基因的獲得 21
實驗4.1 PCR擴增 26
實驗4.2 反轉錄PCR.27
實驗5 限制性內切酶的酶切反應 30
實驗5.1 pUC 18/19質粒DNA的EcoRI單酶解 32
實驗5.2 HindIII和Sal I對pUC18/19質粒DNA的雙酶切 33
實驗6 凝膠電泳法進行DNA的分離和純化 35
實驗7 DNA片段的體外連接 37
實驗8 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備 40
實驗9 重組子的轉化 42
實驗10 菌落PCR篩選陽性重組子 45
實驗11 重組質粒的酶切鑒定 47
實驗12 外源基因在大腸桿菌中的誘導表達 49
實驗13 基因表達產(chǎn)物的檢測分析：SDSPAGE 53
實驗14 Western Blotting(蛋白免疫印記）實驗59
實驗15 Southern印跡實驗63
實驗16 全長cDNA文庫的構建 68
實驗17 凝膠阻滯實驗78
實驗18 染色質免疫共沉淀技術 82
參考文獻 87
附錄一 基因工程實驗中的常用數(shù)據(jù)和換算關系 89
附錄二 基因工程實驗常用試劑、溶液和緩沖液 92
附錄三 PCR實驗引物設計原則 95
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