醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗?zāi)康暮鸵��?br /><br>（一）醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗課目的
<br>（1）加深對理論知識的理解和運用。
<br>（2）學(xué)習(xí)和掌握醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的基本操作技術(shù)。
<br>（3）培養(yǎng)學(xué)生從事科學(xué)實驗的能力，即觀察記錄實驗結(jié)果、整理分析實驗資料、綜合書寫實驗報告和論文的能力。
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<br>（4）培養(yǎng)學(xué)生嚴謹求實的科學(xué)作風(fēng)，獨立分析和解決問題的能力，相互幫助和團結(jié)協(xié)作的精神。
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<br>（二）醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗課要求
<br>（1）嚴格遵守實驗室規(guī)則。
<br>（2）實驗前做好預(yù)習(xí)，明確實驗?zāi)康�、原理、主要方法、實驗步驟和注意事項，做到心中有數(shù)，提高實驗的成功率。
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<br>（3）在實驗時，對要求動手操作的實驗應(yīng)按指導(dǎo)所列的步驟依次進行，仔細觀察并認真記錄實驗結(jié)果或繪圖；多人同做一項實驗時，要注意分工協(xié)作、密切配合；對示教的實驗要仔細觀察，并應(yīng)聯(lián)系有關(guān)理論積極思考；實驗中注意科學(xué)合理地分配和運用時間。
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<br>（4）實驗完畢，應(yīng)認真分析實驗結(jié)果，探討實驗原理，得出可信的結(jié)論。若實驗結(jié)果與理論不符合時，要加以分析討論，以逐步提高自己的科學(xué)思維能力。實驗課后，須按時按要求遞交實驗報告。
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<br>（5）防止發(fā)生各種事故。
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<br>醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗室的實驗對象大多是病原微生物或含病原微生物的血、尿、糞便、痰液及實驗動物等，有傳染的危險。要求同學(xué)們進入實驗室必須嚴格遵守以下規(guī)則：
<br>（1）進入實驗室必須先穿實驗服，只帶必要的實驗指導(dǎo)、書籍和文具進入，實驗指導(dǎo)、書籍和文具應(yīng)放在實驗臺下的抽屜里，其他個人物品一律不得帶入實驗室。
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<br>（2）實驗室內(nèi)禁止飲食、吸煙、用嘴濕潤鉛筆或標簽等行為。
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<br>（3）在操作含病原微生物的實驗時，要堅持無菌操作，既要防止標本被污染，更要防止標本中的病原微生物感染人體或污染環(huán)境。
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<br>（4）用過的吸管、滴管、試管、玻片等器材，應(yīng)放在指定的地方或含消毒液的容器內(nèi)，不得放在桌面上或水池內(nèi)，亦不得將帶病原微生物的液體傾入水槽。
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<br>（5）酒精燈不可互相點燃，以防發(fā)生意外。
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<br>（6）若發(fā)生割破手指、菌液進入口、眼，或遇帶菌材料破損，污染環(huán)境、物品等事故時，應(yīng)立即報告老師，及時進行預(yù)防處理。
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<br>（7）不可擅自搬動示教、實驗器材或室內(nèi)設(shè)施。愛護公物，節(jié)約使用實驗材料。如有損壞，應(yīng)立即向指導(dǎo)教師報告，并主動在破損物品登記本上登記，某些物品需按規(guī)定酌情
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<br>（9）值日生負責(zé)整理清潔實驗室（包括桌面、地面、實驗設(shè)備等），然后關(guān)好水、電、門、窗，脫衣洗手后離室。
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<br>賠償（。8）實驗完畢，應(yīng)清理桌面，把用過的物品放回原處（如顯微鏡、染色液、擦鏡紙、香柏油、火柴等）。
<br>（10）未經(jīng)許可，不得將實驗室內(nèi)任何物品帶出室外。
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<br>抗原抗體反應(yīng)（antigenantibodyreaction）指抗原與相應(yīng)的抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生的特異性反應(yīng)。抗原與抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)是抗原表位與抗體的高變區(qū)（hypervariableregion，HVR）之間的結(jié)構(gòu)互補性，二者相互結(jié)合，在一定條件下出現(xiàn)可見反應(yīng)。
<br>在抗原抗體反應(yīng)中，可用已知抗體檢測未知抗原，也可用已知抗原檢測未知抗體，并可根據(jù)需要選擇定性或定量的測定方法。由于抗體主要存在于血清中，在檢測樣品時一般采用血清進行試驗，故體外的抗原抗體反應(yīng)又稱為血清學(xué)試驗。
<br>（一）抗原抗體反應(yīng)的特點
<br>1.
<br>特異性　一種抗原一般只能與由它刺激機體所產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性即特異性�？乖�抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
<br>可逆性　抗原與抗體的結(jié)合為非共價的可逆結(jié)合，結(jié)合后形成的復(fù)合物在一定條件下可以解離，解離后的抗原和抗體仍保持原有的性質(zhì)。
<br>2.
<br>比例性與可見性　體外抗原抗體反應(yīng)中，確定抗原抗體的最適比例十分重要。天然抗原分子表面一般有多個抗原表位，是多價。而單體的抗體分子（如IgG）是兩價。在抗原如果不考慮抗原抗體的數(shù)量比例，則很可能出現(xiàn)抗原或抗體過剩，
<br>3.
<br>抗體反應(yīng)中，
<br>結(jié)果只有小
<br>分子的復(fù)合物形成，F(xiàn)ab分別結(jié)合兩個抗原分子，相互交叉連接成網(wǎng)格狀復(fù)合體，此時有明顯的反應(yīng)物（沉淀物或凝集物）形成，肉眼可見（圖1-1）。
<br>不能被肉眼觀察到。當抗原抗體的數(shù)量比例恰當時，抗體分子的兩個
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<br>圖1-1　抗原抗體反應(yīng)的比例性和可見性
<br>（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素
<br>1.
<br>電解質(zhì)　抗原與抗體結(jié)合后由親水性變?yōu)槭杷�性，如有適當濃度電解質(zhì)存在，可促進其電荷丟失，形成大分子復(fù)合物。因此免疫學(xué)實驗中常用生理鹽水或含鹽緩沖液作為稀
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<br>釋液或反應(yīng)液。
<br>溫度　在一定溫度范圍內(nèi)（15～40℃），升高溫度可促進抗原抗體分子的碰撞，加速可見反應(yīng)的出現(xiàn)。一般最適溫度為37℃。
<br>2.3.
<br>酸堿度　適宜的pH是抗原抗體反應(yīng)的重要條件，過酸或過堿都影響抗原抗體分子的性質(zhì)。最適酸堿度為pH6～8。
<br>（三）抗原抗體反應(yīng)的類型
<br>根據(jù)抗原的性質(zhì)、出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分不同，可將抗原抗體反應(yīng)分為凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補體參加的反應(yīng)、采用標記物的抗原抗體反應(yīng)等。
<br>第一節(jié)　凝集反應(yīng)
<br>凝集反應(yīng)（agglutinationreaction）是顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)包括直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)。
<br>Ⅰ.直接凝集反應(yīng)
<br>顆粒性抗原（細菌或紅細胞等）與特異性抗體直接結(jié)合，當比例合適時，出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，稱為直接凝集反應(yīng)（directagglutinati-onreactions）（圖1-2）。
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<br>圖1-2　直接凝集反應(yīng)
<br>實驗方法可分玻片法和試管法兩種。玻片凝集試驗一般用作定性檢測，常用于病原菌的鑒定及分型、人類ABO血型的鑒定等；試管凝集試驗常用于定量測定，如診斷傷寒、副傷寒的肥達試驗等。
<br>一、玻片凝集試驗
<br>實驗一　痢疾桿菌的血清學(xué)鑒定【實驗原理】
<br>已知的抗細菌抗體（志賀菌屬多價診斷血清）與待檢細菌反應(yīng)，如兩者為相對應(yīng)的抗原抗體，則直接結(jié)合出現(xiàn)凝集。可定性檢測細菌種類。
<br>【實驗材料】
<br>待檢細菌（痢疾桿菌）18～24h培養(yǎng)物、志賀菌屬多價診斷血清、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈等。
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<br>【實驗方法】
<br>（1）取一張潔凈的載玻片，用記號筆劃分為二格。
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<br>（2）以無菌取材法于左側(cè)加2接種環(huán)診斷血清，右側(cè)加2接種環(huán)生理鹽水。
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<br>（3）左、右側(cè)分別加入挑取的待檢細菌。
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<br>（4）輕搖玻片1～2min，觀察結(jié)果。
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<br>【實驗結(jié)果】
<br>首先觀察鹽水對照側(cè)，呈均勻混濁狀；再觀察試驗側(cè)，出現(xiàn)乳白色凝集塊者即為陽性；對照側(cè)及試驗側(cè)均呈均勻混濁，不出現(xiàn)凝集為陰性；如對照側(cè)及試驗側(cè)均出現(xiàn)凝集，為自凝。
<br>實驗二　ABO血型鑒定【實驗原理】
<br>血型是根據(jù)紅細胞表面血型抗原的種類而判定的。人類ABO血型系統(tǒng)即將紅細胞上有A抗原者稱A型，有B抗原者稱B型，同時存在A、B抗原者稱AB型，無A、B抗原者稱O型。據(jù)此，分別用已知標準含抗A抗體和含抗B抗體的試劑與受試者紅細胞作凝集反應(yīng)，便可判定受試者的血型。
<br>【實驗材料】
<br>玻片、已知標準抗A血型定型試劑和抗B血型定型試劑、刺血針、酒精棉球、無菌干棉球。
<br>【實驗方法】
<br>（1）取潔凈玻片一張用記號筆劃分兩個區(qū)，標明A、B。
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<br>（2）在A、B兩側(cè)分別滴1滴已知標準抗A血型定型試劑和抗B血型定型試劑。
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<br>（3）酒精棉球消毒被檢查者的耳垂，用刺血針刺血。
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<br>（4）取少量血液分別與已知標準抗A血型定型試劑、抗B血型定型試劑混勻。
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<br>（5）搖轉(zhuǎn)玻片數(shù)次，靜置數(shù)分鐘，觀察結(jié)果。
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<br>【實驗結(jié)果】
<br>實驗結(jié)果見表1-1。
<br>表1-1　ABO血型鑒定的實驗結(jié)果
<br>抗A血型定型試劑抗B血型定型試劑血型判定
<br>--O型+-A型-+B型++AB型
<br>注：“+”表示凝集現(xiàn)象；“-”表示未出現(xiàn)凝集。
<br>【注意事項】
<br>（1）一般在室溫20～24℃內(nèi)進行試驗，37℃條件，可使反應(yīng)減弱。
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<br>（2）所用器材必須干燥清潔，為避免交叉污染，建議使用一次性器材。血型定型試劑從
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<br>冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。
<br>（3）反應(yīng)時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。
<br>（4）對含有較多冷凝集素的受檢者，在鑒定血型時往往被誤定為AB型，遇到此種情況，需先用37℃生理鹽水洗滌受檢紅細胞2～3次，以去除吸附在紅細胞上的冷凝集素，然后再進行鑒定。
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<br>（5）血型定型試劑如出現(xiàn)渾濁或變色，則不能使用；若開瓶使用時間較長，最好用已知A、B、O血型紅細胞進行檢查，判斷結(jié)果是否與已知血型相符，以防因制品污染、變質(zhì)失效等原因造成鑒定錯誤。
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<br>二、試管凝集試驗
<br>實驗三　血清抗體效價的測定【實驗原理】
<br>試管凝集反應(yīng)是一種定量試驗，用定量的顆粒性抗原懸液與一系列稀釋度的待檢血清混合，根據(jù)每管內(nèi)顆�？乖�凝集程度，以判定待檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價。如用已知傷寒沙門菌H（或O）菌液檢測患者血清中有無相應(yīng)抗傷寒桿菌H（或O）抗體及其效價。
<br>【實驗材料】
<br>1∶10稀釋的待測患者血清、傷寒沙門菌H（或O）菌液、生理鹽水、小試管、吸管、水浴箱。
<br>【實驗方法】
<br>（1）取7支小試管，排成一排，依次編號，每管加入0.5ml生理鹽水。
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<br>（2）吸取0.5ml待測患者血清（1∶10）加入1號管中，反復(fù)吹吸三次，充分混勻，吸出
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<br>0.5ml加入2號管中，同法混勻，吸出0.5ml加入3號管，依次類推至6號管，吸出0.5ml棄之，7號管為對照。
<br>（3）從7號管開始依次向前每管加入傷寒沙門菌H菌液0.5ml，此時試管中血清的稀釋度又遞增了一倍。
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<br>（4）菌液加畢，振搖試管，充分混勻，置37℃或室溫24h，觀察結(jié)果（表1-2）。拿出時，切勿振蕩。
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