《基因工程原理(第2版)》由徐晉麟、陳淳、徐 沁編著，是作者在多年教學(xué)和科研經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上參考 大量文獻(xiàn)精心編寫(xiě)而 成，力求內(nèi)容新穎，方法先進(jìn)，脈絡(luò)清晰，原理分明 ，術(shù)語(yǔ)規(guī)范，文圖并茂。本 書(shū)除緒論外，共分9章：基因工程的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ) ，原核生物分子克隆的 宿主和載體系統(tǒng)，基因文庫(kù)的構(gòu)建和篩選，基因組 DNA的分析，聚合酶鏈 反應(yīng)與連接酶反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞中克隆基因的表達(dá)，轉(zhuǎn) 基因動(dòng)植物，人類基因 鑒定和基因診斷，基因治療。在每章后都配有習(xí)題， 供讀者練習(xí)，并在書(shū)后 附有索引，供讀者查閱。
《基因工程原理(第2版)》適合作為高等院校生 物科學(xué)、生物技術(shù)、生物工程專業(yè)和農(nóng)林、醫(yī) 藥院校相關(guān)專業(yè)的教材，也可供相關(guān)科學(xué)研究人員參考。
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目錄
第二版前言
第一版前言
緒論1
一？ 基因工程的理論和技術(shù)基礎(chǔ)及工作程序1
二？ 基因工程技術(shù)的建立與發(fā)展2
三？ 基因工程的產(chǎn)業(yè)化及應(yīng)用6
四？ 轉(zhuǎn)基因生物的安全性9
第一章基因工程的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)12
第一節(jié)基因和信息流12
一？ 基因的概念12
二？ 遺傳的中心法則12
三？ 基因表達(dá)的調(diào)節(jié)——操縱子模型14
第二節(jié)核酸的生物化學(xué)18
一？ 核酸大分子的結(jié)構(gòu)18
二？ DNA雙螺旋的變性與復(fù)性19
第三節(jié)分子雜交21
一？ 原位分子雜交21
二？ 芯片技術(shù)23
三？ 印跡雜交23
四？ 異源雙鏈定位法和R環(huán)定位法26
第四節(jié)基因工程中常采用的酶類27
一？ 序列特異的DNA限制性酶27
二？ 連接酶和激酶29
三？ DNA聚合酶和RNA聚合酶30
第五節(jié)研究DNA和RNA的方法30
一？ 核酸的分離純化30
二？ 電泳30
三？ DNA測(cè)序36
四？ 體外突變39
第六節(jié)實(shí)例1:鑒別特定基因轉(zhuǎn)錄物的轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)45
一？ 研究目的45
二？ 已知的信息和試劑45
三？ 基本策略45
四？ 注釋46
五？ 可供參考的思路48
習(xí)題48
第二章原核生物分子克隆的宿主和載體系統(tǒng)51
第一節(jié)應(yīng)用廣泛的宿主菌51
一？ Ecoli K12的生物學(xué)51
二？ 細(xì)菌的限制與修飾系統(tǒng)51
三？ 大腸桿菌的克隆載體53
第二節(jié)質(zhì)粒載體53
一？ 質(zhì)粒生物學(xué)53
二？ 質(zhì)粒上常編碼抗生素抗性基因54
三？ 質(zhì)粒DNA克隆載體55
四？ 通過(guò)轉(zhuǎn)化將DNA轉(zhuǎn)移到大腸桿菌中56
第三節(jié)噬菌體克隆載體58
一？ λ噬菌體的生物學(xué)58
二？ λ噬菌體克隆載體59
三？ M13噬菌體克隆載體60
第四節(jié)基因組DNA克隆載體63
一？ 黏粒載體63
二？ 酵母人工染色體載體64
三？ 細(xì)菌人工染色體載體65
四？ P1噬菌體載體和P1人工染色體66
五？ 哺乳動(dòng)物人工染色體載體68
第五節(jié)外源DNA和載體連接的方法68
一？ 外源DNA和載體連接方法的分類68
二？ 定向克隆70
第六節(jié)實(shí)例2:擬南芥肌鈣網(wǎng)蛋白基因在Ecoli中
的調(diào)節(jié)表達(dá)70
一？ 研究目的70
二？ 已知的信息和試劑70
三？ 基本策略71
四？ 注釋73
五？ 可供參考的思路73
習(xí)題73
第三章基因文庫(kù)的構(gòu)建和篩選75
第一節(jié)基因文庫(kù)的構(gòu)建75
一？ 基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)75
二？ 構(gòu)建基因文庫(kù)的克隆載體和篩選策略77
三？ 亞克隆80
第二節(jié)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和篩選81
一？ mRNA的分離純化82
二？ cDNA合成83
三？ cDNA克隆載體86
第三節(jié)cDNA文庫(kù)的篩選88
一？ 簡(jiǎn)并寡核苷酸探針88
二？ 抗體探針90
三？ 差示雜交92
四？ 扣除雜交92
第四節(jié)cDNA表達(dá)文庫(kù)的功能篩選94
一？ 蛋白質(zhì)活性分析94
二？ 酵母雙雜交系統(tǒng)95
三？ cDNA噬菌體展示技術(shù)97
第五節(jié)用克隆cDNA作為反應(yīng)物99
一？ RNA印跡99
二？ RNase保護(hù)法100
三？ 核連綴(轉(zhuǎn)錄)分析100
第六節(jié)實(shí)例3:體外克隆編碼細(xì)胞內(nèi)信號(hào)蛋白的基因101
一？ 研究目的101
二？ 可利用的信息和資源102
三？ 基本策略102
四？ 注釋102
五？ 可供參考的思路102
習(xí)題104
第四章基因組DNA的分析106
第一節(jié)基因組作圖106
一？ 遺傳圖和細(xì)胞學(xué)圖106
二？ 物理圖108
三？ 基因定位116
第二節(jié)基因組長(zhǎng)DNA片段的操作120
一？ 用熒光激活細(xì)胞分揀法來(lái)分揀染色體121
二？ 標(biāo)簽克隆法121
三？ 用DNA池來(lái)篩選基因組文庫(kù)122
第三節(jié)基因調(diào)節(jié)序列作圖123
一？ 用體外表達(dá)進(jìn)行基因調(diào)節(jié)序列作圖123
二？ 定位蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的分析方法124
三？ 電泳遷移率變動(dòng)分析126
第四節(jié)實(shí)例4:通過(guò)定點(diǎn)克隆分離一個(gè)人類致病基因127
一？ 研究目的127
二？ 已知的信息和試劑127
三？ 基本策略128
四？ 注釋128
五？ 供參考的思路128
習(xí)題128
第五章聚合酶鏈反應(yīng)與連接酶反應(yīng)135
第一節(jié)基本的PCR方法135
一？ PCR擴(kuò)增循環(huán)136
二？ PCR需用的DNA聚合酶137
三？ PCR引物設(shè)計(jì)138
四？ 兩個(gè)引物間的最佳距離139
五？ PCR實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)化140
第二節(jié)反轉(zhuǎn)錄PCR141
一？ cDNA末端快速擴(kuò)增141
二？ 定量RTPCR142
三？ 差異表達(dá)基因的擴(kuò)增144
四？ 抑制性消減雜交145
五？ 腸道細(xì)菌基因間重復(fù)保守
序列聚合酶鏈反應(yīng)147
第三節(jié)PCR用于診斷147
一？ 在組織樣本中檢測(cè)病原體148
二？ 用序列標(biāo)簽位點(diǎn)進(jìn)行基因型分型148
第四節(jié)PCR在實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用149
一？ 用PCR亞克隆靶DNA149
二？ PCR介導(dǎo)產(chǎn)生融合基因151
第五節(jié)其他的DNA擴(kuò)增和靶序列的檢測(cè)方法152
一？ 連接酶鏈反應(yīng)152
二？ 連接酶檢測(cè)反應(yīng)153
三？ 缺口連接酶鏈反應(yīng)153
四？ 不對(duì)稱缺口連接酶鏈反應(yīng)154
五？ 解鏈酶擴(kuò)增156
第六節(jié)實(shí)例5: 用RTPCR克隆細(xì)胞特異轉(zhuǎn)錄本156
一？ 研究目的156
二？ 可利用的信息和試劑156
三？ 基本策略157
四？ 注釋157
五？ 可供參考的思路158
習(xí)題159
第六章培養(yǎng)細(xì)胞中克隆基因的表達(dá)161
第一節(jié)基因調(diào)控的研究161
一？ 表達(dá)載體161
二？ 報(bào)道基因162
三？ 反義技術(shù)167
四？ RNA干擾169
第二節(jié)基因在細(xì)胞系中表達(dá)的方法171
一？ 基因轉(zhuǎn)染的策略172
二？ 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染172
三？ 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染173
第三節(jié)用酵母作為模式真核細(xì)胞176
第四節(jié)蛋白質(zhì)在培養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)177
一？ Ecoli 表達(dá)系統(tǒng)177
二？ 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)177
第五節(jié)實(shí)例6:啟動(dòng)子選擇轉(zhuǎn)錄因子的研究180
一？ 目的180
二？ 可利用的信息和試劑180
三？ 基本策略180
四？ 注釋181
五？ 可供參考的思路183
習(xí)題183
第七章轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物184
第一節(jié)果蠅發(fā)育的分子生物學(xué)184
一？ P因子介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化184
二？ P因子增強(qiáng)子阱載體185
三？ 可介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的其他真核轉(zhuǎn)座因子187
第二節(jié)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因的農(nóng)作物188
一？ 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移189
二？ 用基因槍制備轉(zhuǎn)基因水稻和玉米191
第三節(jié)轉(zhuǎn)基因小鼠193
一？ 用受精卵細(xì)胞制備轉(zhuǎn)基因小鼠193
二？ 通過(guò)干細(xì)胞的同源重組進(jìn)行基因敲除195
三？ 人類疾病的轉(zhuǎn)基因小鼠模型199
第四節(jié)轉(zhuǎn)基因家畜200
一？ 用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備藥物201
二？ 動(dòng)物的體細(xì)胞克隆202
第五節(jié)實(shí)踐7:敲除轉(zhuǎn)基因鼠產(chǎn)生特異基因206
一？ 研究目的206
二？ 可利用的信息和試劑206
三？ 基本策略206
四？ 注釋207
五？ 可供參考的思路208
習(xí)題208
第八章人類基因鑒定和基因診斷211
第一節(jié)內(nèi)源基因突變引起的人類疾病211
一？ 基因點(diǎn)突變和移碼突變所導(dǎo)致的遺傳病211
二？ 基因的缺失？重復(fù)和重排導(dǎo)致的遺傳病212
三？ 動(dòng)態(tài)突變214
四？ 癌基因突變和人類的腫瘤216
五？ 基因印記 219
第二節(jié)病毒感染引起的人類嚴(yán)重疾病221
一？ 禽流感221
二？ SARS222
三？ 艾滋病222
四？ 普里昂病223
第三節(jié)基因定位？鑒別和診斷225
一？ 致病基因的定位225
二？ 不同類型基因突變的檢測(cè)227
三？ 缺失和重復(fù)的檢測(cè)233
四？ 基因重排的檢測(cè)235
五？ 基因印記變異的檢測(cè)236
六？ DNA三核苷酸擴(kuò)增的檢測(cè)237
七？ 病原體的基因檢測(cè)237
八？ 癌基因和抗癌基因突變的檢測(cè)242
第四節(jié)產(chǎn)前診斷和設(shè)計(jì)嬰兒244
一？ 產(chǎn)前診斷244
二？ 設(shè)計(jì)嬰兒246
第五節(jié)攜帶者的檢出247
第六節(jié)實(shí)例8:奧爾波特綜合征的檢測(cè)248
一？ 研究目的248
二？ 可利用的信息和試劑248
三？ 基本策略248
四？ 注釋248
五？ 思路擴(kuò)展249
習(xí)題249
第九章基因治療251
第一節(jié)基因治療的策略251
一？ 體細(xì)胞基因治療的策略251
二？ 基因治療的關(guān)鍵步驟253
三？ 基因治療的靶細(xì)胞選擇254
四？ 體細(xì)胞基因治療的途徑254
第二節(jié)基因轉(zhuǎn)移的方法256
一？ 基因轉(zhuǎn)移的非生物方法256
二？ 基因轉(zhuǎn)移的病毒方法257
第三節(jié)基因治療藥物262
一？ p53基因262
二？ siRNA263
三？ 反義RNA265
四？ 核酶265
五？ 肽核酸 268
六？ 三鏈 DNA269
七？ 自殺基因271
八？ 短片段同源序列的更換技術(shù)271
九？ 激活小RNA272
第四節(jié)基因治療的安全性274
第五節(jié)基因治療的新方法275
一？ 基因組編輯核酸酶275
二？ 干細(xì)胞介導(dǎo)重編程283
三？ 通過(guò)核抑制治療線粒體病291
第六節(jié)實(shí)例9:利用iPSC治療艾滋病291
一？ 研究目的291
二？ 可利用的信息和試劑292
三？ 基本策略292
四？ 注釋292
五？ 可供參考的思路293
習(xí)題293
主要參考文獻(xiàn)294
索引297
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