本書系統(tǒng)介紹了PCR儀質(zhì)量控制相關(guān)技術(shù)。其主要內(nèi)容包括PCR技術(shù)的基本原理、現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)和應(yīng)用領(lǐng)域,PCR儀的常見分類、系統(tǒng)組成、操作及注意事項(xiàng)、維護(hù)保養(yǎng)與維修,影響PCR擴(kuò)增質(zhì)量因素分
析,PCR儀期間核查,PCR儀的計(jì)量特性和校準(zhǔn)。本書內(nèi)容全面,圖文并茂,將PCR儀的選購、管理、使用、維護(hù)、計(jì)量校準(zhǔn)、期間核查、PCR實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)化等內(nèi)容進(jìn)行了有機(jī)融合,并對(duì)工作中遇到的知識(shí)難點(diǎn)和常見問題進(jìn)行了講解,使讀者一目了然。本書針對(duì)性、指導(dǎo)性和可操作性強(qiáng),具有較高的實(shí)用價(jià)值。
適讀人群 :實(shí)驗(yàn)室管理人員和一線操作人員,相關(guān)領(lǐng)域的科 研人員和相關(guān)專業(yè)的在校師生
1)本書介紹了PCR儀質(zhì)量控制相關(guān)技術(shù),內(nèi)容全面,圖文并茂,對(duì)做好核酸檢測具有較高的實(shí)用價(jià)值。
2)本書內(nèi)容全面,圖文并茂,將PCR儀的選用、管理、使用、維護(hù)、計(jì)量校準(zhǔn)、期間核查、PCR實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)化等內(nèi)容進(jìn)行了有機(jī)融合,并對(duì)工作中遇到的知識(shí)難點(diǎn)和常見問題進(jìn)行了講解,使讀者一目了然,針對(duì)性、指導(dǎo)性和可操作性強(qiáng)。
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一種被廣泛用于放大擴(kuò)增特定 DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),因其展現(xiàn)了前所未有的敏感性和特異性 ,故受到了人們的高度重視,可以說,這項(xiàng)技術(shù)徹底改變了 DNA分析科學(xué)研究的現(xiàn)狀。如今各種各樣以 PCR 為基礎(chǔ)的 DNA序列擴(kuò)增和控制方法得到了迅猛發(fā)展, 已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究的各個(gè)領(lǐng)域。作為分析 PCR反應(yīng)的基礎(chǔ) —聚合酶鏈反應(yīng)分析儀(簡稱 PCR儀),也從最原始的恒溫水浴加機(jī)械臂、定性 PCR、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR系統(tǒng),發(fā)展到現(xiàn)在的數(shù)字 PCR系統(tǒng)。在新冠病毒核酸檢測中,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR系統(tǒng)發(fā)揮了不可替代的重要作用。因此,做好 PCR儀的質(zhì)量控制工作,確保 PCR儀性能持續(xù)良好,對(duì)分子生物學(xué)的研究,特別是確保防疫研究數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠,從而確保國家公共衛(wèi)生和廣大人民群眾生命安全方面,具有非常重要的意義。
本書開篇介紹了 PCR技術(shù)的產(chǎn)生、現(xiàn)狀以及未來發(fā)展趨勢(shì),由此對(duì) PCR儀從選購到報(bào)廢的全壽命質(zhì)量控制方法做了系統(tǒng)闡述。為了驗(yàn)證溫度計(jì)量性能對(duì) PCR結(jié)果質(zhì)量的影響,書中分別選擇三類具有代表性的基因片段,用目前市場主流 PCR儀進(jìn)行了大量實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步證明做好 PCR儀質(zhì)量控制工作是確保 PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠的重要手段之一。本書將 PCR儀的選購、管理、使用、維護(hù)、計(jì)量校準(zhǔn)、期間核查、 PCR實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)化等內(nèi)容進(jìn)行了有機(jī)融合,是一本綜合性、指導(dǎo)性較強(qiáng)的專業(yè)書籍,適宜作為教育培訓(xùn)用書。
本書編寫組成員由多專業(yè)、多領(lǐng)域的專家組成,這些專家長期從事食品與藥品安全檢測、海關(guān)防疫檢測、病原微生物研究、醫(yī)學(xué)計(jì)量工作,具有扎實(shí)的專業(yè)理論基礎(chǔ)以及豐富的工作經(jīng)驗(yàn)。本書由張辰、帥萬鈞、饒紅擔(dān)任主編,李杰、高榮保、肖哲擔(dān)任副主編,楊杰斌擔(dān)任主審,參編人員有:馬飛、王旖、王楊柳、王盛長、尹遵義、鄧厚斌、石展鷹、龍陽、龍成章、葉福鈺、朱娟、朱佳奇、劉丹、劉瑋、劉潔、劉翌、劉紅彥、劉念波、許澍、孫靈利、孫俊峰、牟強(qiáng)善、紀(jì)金龍、李征、李開年、李明明、楊峰、楊智、楊天鶴、楊潤楠、吳明岳、何飛飛、余時(shí)帆、鄒明松、忻之棟、宋洋、宋天一、張弓、張崢、張毅、張廣征、張永兵、張紹福、張曉梅、張婷婷、陳曦、范志永、林聯(lián)君、卓華、周文、周成林、周李華、周選超、鄭子偉、鄭沁春、趙慧、趙丹俠、郝棟棟、郝繼博、侯雪新、祝天宇、耿蕓仙、莫淑琴、殷銀鎖、郭錚蕾、梁曉會(huì)、董亮、韓志鑫、韓海建、曾冰梅、虞道偉、蔡向東、蔡雪鳳、蔡錫松、熊鈺忠、薛誠。
在本書編寫的過程中,得到了來自行業(yè)專家和以杭州博日為代表的儀器生產(chǎn)廠家的大力支持,特別是在 PCR實(shí)驗(yàn)部分,得到了中國食品藥品檢定研究院、北京朝陽疾病預(yù)防控制中心、中國海關(guān)科學(xué)技術(shù)研究中心、北京林電偉業(yè)計(jì)量科技有限公司的積極配合,在此對(duì)各位專家及相關(guān)單位表示誠摯的感謝。由于編者知識(shí)水平有限,書中難免有不足之處,懇請(qǐng)讀者和同行給予批評(píng)指正!
軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院科研保障中心實(shí)驗(yàn)儀器室主任 張辰
序
前言
第一章 PCR技術(shù)基礎(chǔ) ……… 1
第一節(jié) PCR技術(shù)基本原理 ………1
第二節(jié) PCR技術(shù)的發(fā)展歷程及現(xiàn)狀……………………… 8
第三節(jié) PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域 … 12
第四節(jié) PCR技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì) … 14
第二章 PCR儀 ……………… 15
第一節(jié) PCR儀常見分類 ……… 15
第二節(jié) PCR儀系統(tǒng)組成 ……… 20
第三節(jié) PCR儀的操作及注意事項(xiàng)………………… 43
第四節(jié) PCR儀維護(hù)保養(yǎng)與維修 … 57
第三章 影響 PCR擴(kuò)增質(zhì)量因素分析…………………… 68
第一節(jié) 溫度和時(shí)間對(duì) PCR擴(kuò)增結(jié)果影響的實(shí)驗(yàn)研究………… 68
第二節(jié) PCR儀期間核查 ………134
第三節(jié) 核酸擴(kuò)增結(jié)果的室內(nèi)質(zhì)控………………… 146
第四章 PCR儀的校準(zhǔn)溯源 151
第一節(jié) PCR儀計(jì)量特性 ………151
第二節(jié) PCR 儀的校準(zhǔn) …………155
參考文獻(xiàn)……………………… 167