生物化學實驗教程(第二版)包括兩篇共10章。第一篇是生物化學實驗基礎(chǔ),主要是規(guī)范學生實驗行為,介紹傳統(tǒng)的、現(xiàn)代的生物化學實驗技術(shù)。第二篇是生物化學實驗,按照配套教材《生物化學》的知識體系,根據(jù)參編院校實驗目錄和部分文獻,選編了62個實驗,包括基礎(chǔ)性實驗、綜合性實驗和設(shè)計性實驗。最后是附錄,選擇了常用的實驗數(shù)據(jù)共26個表格供參考。本書可作為應用型本科院校各類理工科專業(yè)生物化學實驗教材或參考書。
這是應用型本科系列教材,針對性、實用性強。第一版使用多年,改版后更加成熟。
生物化學是生物科學、生物技術(shù)、生物工程、食品工程、應用化學,以及農(nóng)、林、醫(yī)等專業(yè)的基礎(chǔ)學科。生物化學是以實驗為基礎(chǔ)的學科,生物化學實驗的技術(shù)和方法直接推動了生物化學的發(fā)展。相對于理論教學,生物化學實驗的教學具有實踐性、綜合性和創(chuàng)新性。生物化學實驗教學的宗旨是讓學生掌握生物化學的基本實驗方法和基本技能,培養(yǎng)學生觀察問題、分析問題和解決問題的能力,培養(yǎng)學生嚴謹、務實、創(chuàng)新的科學作風,為日后從事相關(guān)工作和研究奠定堅實的知識基礎(chǔ)。
國家積極引導和推動地方本科高校向應用型高校的轉(zhuǎn)型與發(fā)展,近年來應用型高校建設(shè)呈現(xiàn)良好勢頭。為適應應用型本科高校教材建設(shè)的形勢,華中科技大學出版社組織了全國應用型本科院;瘜W課程統(tǒng)編教材的編寫工作。多所院校一線教師結(jié)合多年的實驗教學經(jīng)驗,圍繞“寬口徑、應用型、高素質(zhì)”的目標,突出實用、適用、夠用和創(chuàng)新的“三用一新”特點,共同編寫了這本生物化學實驗教程。本書第一版問世后,承蒙讀者厚愛,被全國不少應用型高校選用為實驗教材,已重印多次。許多任課教師和讀者給予好評,普遍反映該教材編寫風格簡明、實驗方案順暢、實驗結(jié)果明顯。同時,對不足之處也提出了許多寶貴意見。在此,全體編者向各位同仁和讀者表示衷心的感謝。
全書共分兩篇10章。第一篇是生物化學實驗基礎(chǔ),主要是規(guī)范學生實驗行為,介紹傳統(tǒng)的、現(xiàn)代的生物化學實驗技術(shù)。第二篇是生物化學實驗,根據(jù)參編院校實驗目錄和部分文獻,選編了65個實驗,包括基礎(chǔ)性實驗、綜合性實驗和設(shè)計性實驗。選編這些實驗,一是為了充分將生物化學技術(shù)應用于實驗教學,二是為了配合本系列統(tǒng)編教材《生物化學》的編排體系,三是為了適應各地應用型高校發(fā)展的不均衡性,方便各校有選擇性地開展實驗教學。設(shè)計性實驗均為編者在科研或指導學生課題研究中據(jù)實設(shè)計的,旨在培養(yǎng)部分學生的科研、創(chuàng)新能力。最后是附錄,附以生物化學實驗中常用的實驗數(shù)據(jù)。本書可作為全國應用型本科院校各類理工科專業(yè)生物化學實驗教材或參考書。
此次編寫分工如下:聊城大學東昌學院王金亭、吳廣慶編寫第1、2章和實驗1、2、6~8、16、22、28、30、31、36、43、44、59、64,湖南農(nóng)業(yè)大學方俊、周曉明、胡超編寫第3章第4、5節(jié)和實驗4、11、17~19、23、26、37、52、55、62,湖南文理學院李峰和李榮、寧夏大學王興平編寫第3章第1、2節(jié)和實驗10、21、61,武昌首義學院李橫江編寫第3章第3、6節(jié)和實驗25、53、54、56、63,上海海洋大學李燕編寫實驗4、14、38~41、45、50、51、60,西南交通大學盧曉英編寫實驗24、46~49、65,天津科技大學夏婷編寫實驗3、20、29、42、57、58,電子科技大學中山學院李雪雁編寫實驗5、9、12、15、27,沈陽農(nóng)業(yè)大學劉鵬舉編寫實驗13、32~35。附錄部分由王金亭和方俊提供,最后由王金亭和方俊負責全書的統(tǒng)稿工作,吳廣慶也參與了部分校訂工作。另外,杜希華、林佳、周存山、張小菊曾參與第一版的編寫工作,華中科技大學出版社對本教材的編寫給與了大力支持與幫助,在此謹致謝意。同時對選用的參考文獻及有關(guān)材料的作者也表示衷心的感謝。
第二版教材雖經(jīng)全體編者悉心勘校,疏漏和不妥之處仍在所難免,懇請廣大讀者繼續(xù)給與熱忱關(guān)注和支持,并提出寶貴意見。
王金亭,男,1966年生,教授,聊城大學東昌學院化學與生物系主任.長期從事生物化學教學與科研,編寫教材《生物化學實驗教程》(主編)、《生命科學導論》(主編)、《生物化學》(副主編)
第一篇生物化學實驗基礎(chǔ)
第1章生物化學實驗的基本知識(3)
1.1實驗室規(guī)范(3)
1.2玻璃儀器(6)
1.3生物化學實驗常用儀器(11)
第2章生物化學實驗的基本要求(19)
2.1實驗樣品的制備(19)
2.2實驗的準確性與誤差(24)
2.3實驗記錄和實驗報告(26)
第3章生物化學基本實驗技術(shù)(28)
3.1層析技術(shù)(28)
3.2電泳技術(shù)(36)
3.3離心技術(shù)(42)
3.4膜分離技術(shù)(49)
3.5光譜學技術(shù)(53)
3.6其他生物化學實驗技術(shù)(62)
第二篇生物化學實驗
第4章蛋白質(zhì)(73)
實驗1氨基酸和蛋白質(zhì)的呈色反應(73)
實驗2蛋白質(zhì)等電點的測定和沉淀反應(77)
實驗3血清蛋白鹽析及分子篩層析脫鹽(79)
實驗4蛋白質(zhì)含量的測定(81)
Ⅰ雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量(81)
Ⅱ考馬斯亮藍結(jié)合法(Bradford法)測定蛋白質(zhì)含量(83)
Ⅲ紫外光吸收法測定蛋白質(zhì)含量(85)
Ⅳ微量凱氏定氮法測定總蛋白含量(86)
ⅤFolin酚法測定蛋白質(zhì)含量(88)
實驗5氨基酸的分離鑒定(90)
Ⅰ紙層析分離鑒定氨基酸(90)
Ⅱ離子交換層析分離混合氨基酸(91)
實驗6血清蛋白的醋酸纖維素薄膜電泳(93)
實驗7DNS氨基酸的制備和鑒定(95)
實驗8DNP氨基酸的制備和鑒定(98)
實驗9用DNS法鑒定蛋白質(zhì)或多肽的N端氨基酸(100)
實驗10SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳分離細菌總蛋白質(zhì)(102)
實驗11SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量(104)
實驗12牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定(108)
實驗13大豆蛋白的提取與含量測定(109)
實驗14葡聚糖凝膠層析法分離純化蛋白質(zhì)(111)
第5章核酸(114)
實驗15核酸含量的測定(114)
Ⅰ定磷法定量測定核酸(114)
Ⅱ地衣酚法定量測定RNA(116)
Ⅲ二苯胺法測定DNA含量(117)
實驗16過碘酸氧化法定量測定核苷酸(118)
實驗17酵母核糖核酸的分離及組分鑒定(121)
實驗18菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定(123)
實驗19動物肝臟中DNA的提取(125)
實驗20堿裂解法小量提取質(zhì)粒DNA(127)
實驗21DNA瓊脂糖凝膠電泳(128)
實驗22AMP、ADP和ATP的分離(130)
Ⅰ薄層層析分離AMP、ADP和ATP(130)
Ⅱ醋酸纖維素薄膜電泳鑒定AMP、ADP、ATP(132)
第6章酶學(134)
實驗23酶的特性實驗(134)
實驗24米氏常數(shù)測定(135)
Ⅰ脲酶米氏常數(shù)的簡易測定(135)
Ⅱ過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定(137)
Ⅲ胰蛋白酶米氏常數(shù)的測定(139)
實驗25酶活力的測定(140)
Ⅰ液化型淀粉酶活力的測定(140)
Ⅱ薄層層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶活性(142)
Ⅲ分光光度法測定血液中轉(zhuǎn)氨酶的活力(143)
實驗26酶的制備(146)
Ⅰ乳酸脫氫酶粗提液的制備及活力測定(146)
Ⅱ枯草桿菌堿性磷酸酶的制備及酶活力的測定(147)
Ⅲ馬鈴薯多酚氧化酶的制備及性質(zhì)實驗(150)
實驗27酶的固定化及對酶活性的影響(152)
實驗28琥珀酸脫氫酶競爭性抑制(154)
實驗29蔗糖酶相對分子質(zhì)量的測定(SDSPAGE電泳法)(156)
第7章維生素和輔酶(159)
實驗30紫外分光光度法測定魚肝油中維生素A的含量(159)
實驗31食物中脂溶性維生素含量分析(高效液相色譜)(160)
實驗32維生素B1的定性測定(163)
實驗33維生素B1的含量測定(164)
實驗34熒光光度法測定維生素B2的含量(166)
實驗35測定維生素C的含量(167)
Ⅰ2,6二氯酚靛酚滴定法測定維生素C的含量(167)
Ⅱ銅離子氧化法測定維生素C的含量(169)
Ⅲ磷鉬酸法測定維生素C的含量(170)
實驗36輔酶Q10的制備和檢測(172)
實驗37分離層析儀分離核黃素和血紅蛋白(174)
第8章生物能學和物質(zhì)代謝(177)
實驗38丙酮酸含量的測定(分光光度法)(177)
實驗39發(fā)酵過程中無機磷的利用(178)
實驗40肌糖原酵解作用(179)
實驗41糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定(181)
實驗42脂肪酸的β氧化(182)
實驗432,6二氯酚靛酚顯色反應測定電子傳遞(184)
實驗44乳酸脫氫酶的遞氫作用(186)
實驗45氨基移換反應(187)
第9章綜合性實驗(190)
實驗46糖的顏色反應(190)
ⅠMolisch反應鑒定醛糖(190)
ⅡSeliwanoff反應鑒定酮糖(191)
ⅢTollen反應鑒定戊糖(192)
實驗47血糖含量的測定(193)
ⅠFolinWu法測定血糖含量(193)
ⅡFolinMalmors法測定血糖含量(194)
Ⅲ鄰甲苯胺法測定血糖含量(196)
ⅣGODPAP法測定血糖含量(198)
實驗48總糖和還原糖含量的測定(199)
Ⅰ蒽酮比色法測定糖的含量(199)
Ⅱ斐林試劑比色法測定糖的含量(201)
Ⅲ3,5二硝基水楊酸比色法測定糖的含量(203)
實驗49脂類的測定(206)
Ⅰ索氏抽提法測定粗脂肪含量(206)
Ⅱ脂肪酸的測定(207)
Ⅲ血清甘油三酯簡易測定法(208)
Ⅳ醋酸酐法測定血清中膽固醇含量(210)
實驗50天然產(chǎn)物中多糖的分離、純化與鑒定(211)
Ⅰ多糖的提取、純化(211)
Ⅱ多糖的鑒定(212)
實驗51血清蛋白的分離、純化與鑒定(214)
實驗52凝膠層析法分離純化脲酶(217)
實驗53小麥萌發(fā)前、后淀粉酶活力的比較(220)
實驗54質(zhì)粒DNA的分離、純化及鑒定(222)
實驗55多聚酶鏈式反應(PCR)技術(shù)擴增目的基因片段(225)
實驗56重組質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化(227)
實驗57感受態(tài)細胞的制備及轉(zhuǎn)化(230)
實驗58DNA的酶切分析(231)
實驗59植物總黃酮的提取與測定(233)
實驗60蘆薈中活性成分的提取和純化(234)
Ⅰ蘆薈苷的提取和純化(234)
Ⅱ高速逆流色譜法分離蘆薈苷粗提物(236)
第10章設(shè)計性實驗(240)
實驗61半定量RTPCR檢測基因的表達差異(240)
實驗62卵磷脂的提取和鑒定(242)
實驗63強酸性陽離子交換樹脂在廢水處理中的應用(244)
實驗64轉(zhuǎn)基因植物的PCR鑒定(246)
實驗65卵黃高磷蛋白的提取(247)
附錄(251)
附錄A緩沖液的配制(251)
附錄B常用實驗數(shù)據(jù)表(256)
附錄C硫酸銨飽和度常用表(261)
附錄D層析技術(shù)實驗數(shù)據(jù)(262)
參考文獻(265)