目錄
前言
緒論 1
一、人類對生殖活動的認知 1
二、生殖細胞 3
三、哺乳動物個體發(fā)生 3
四、生殖生物技術(shù)的發(fā)展 4
五、生殖生物技術(shù)在動物繁殖中的應(yīng)用 9
六、生殖生物學(xué)基礎(chǔ)研究的熱點與發(fā)展趨勢 10
參考文獻 12
第一章 卵母細胞體外成熟 13
第一節(jié) 卵母細胞成熟的特征 13
一、卵丘細胞的成熟 13
二、透明帶的成熟 15
三、卵母細胞的細胞膜成熟 16
四、卵母細胞的細胞核成熟 18
五、卵母細胞的細胞質(zhì)成熟 22
第二節(jié) 卵母細胞體外成熟培養(yǎng) 25
一、卵巢卵母細胞的收集 25
二、卵母細胞成熟培養(yǎng)操作 27
三、小鼠卵母細胞體外成熟培養(yǎng)操作要點 29
四、家畜卵母細胞體外成熟培養(yǎng)操作要點 29
第三節(jié) 卵母細胞的質(zhì)量評價方法 30
一、物理方法 31
二、化學(xué)方法 33
三、體外受精、體外胚胎培養(yǎng)評定法 35
第四節(jié) 影響卵母細胞體外成熟的因素 35
一、影響卵母細胞體外成熟的主要因素 35
二、促進卵母細胞體外成熟的措施39
參考文獻 40
第二章 體外受精 43
第一節(jié) 哺乳動物體外受精的研究簡史 43
第二節(jié) 精液與精子的生物學(xué)特性 46
一、精液的主要常規(guī)參數(shù) 46
二、有關(guān)精子的一些生物學(xué)數(shù)據(jù) 49
第三節(jié) 精子獲能 51
一、精子獲能原理 51
二、精子獲能處理 54
三、提高精子活力的措施 59
四、精子獲能的檢測59
五、影響精子體外獲能的因素 62
六、體外誘導(dǎo)頂體反應(yīng) 63
第四節(jié) 實驗動物的體外受精操作 65
一、小鼠的體外受精操作 65
二、大鼠的體外受精操作 69
三、兔的體外受精操作 72
第五節(jié) 家畜的體外受精操作74
一、牛的體外受精操作 74
二、綿羊與山羊的體外受精操作 78
三、豬的體外受精操作 79
四、不同動物體外受精操作的主要參考指標 83
第六節(jié) 顯微受精 83
一、顯微受精研究概況 83
二、ICSI 操作過程 85
三、影響顯微受精的因素 89
四、ICSI 的轉(zhuǎn)基因應(yīng)用 91
參考文獻 91
第三章 胚胎體外生產(chǎn) 94
第一節(jié) 哺乳動物早期胚胎發(fā)育 95
一、母源—合子基因轉(zhuǎn)變 95
二、致密化的桑椹胚形成 100
三、囊胚形成機制 102
四、囊胚孵化機制 104
五、胚胎的細胞凋亡 106
第二節(jié) 胚胎體外發(fā)育阻滯與胚胎能量代謝 107
一、胚胎體外發(fā)育阻滯現(xiàn)象和機理 107
二、胚胎體外發(fā)育阻滯的克服109
三、早期胚胎發(fā)育的能量代謝途徑 111
第三節(jié) 培養(yǎng)系統(tǒng) 112
一、培養(yǎng)用具的選擇與要求 112
二、氣相條件 113
三、培養(yǎng)溫度 114
四、光照 115
五、濕度 115
六、培養(yǎng)液 115
第四節(jié) 胚胎培養(yǎng)液 115
一、幾種動物輸卵管液的化學(xué)成分 116
二、培養(yǎng)液的種類和組成 117
三、培養(yǎng)液中主要成分的作用 126
四、培養(yǎng)液的配制方法 128
第五節(jié) 胚胎收集與胚胎培養(yǎng)體系 129
一、胚胎收集 129
二、胚胎培養(yǎng)體系 132
第六節(jié) 胚胎質(zhì)量評價 136
一、胚胎細胞計數(shù)方法 137
二、胚胎細胞計數(shù)具體操作 139
三、胚胎與胎兒細胞的染色體分析技術(shù) 141
四、囊胚輔助孵化技術(shù)143
五、胚胎細胞凋亡檢測分析技術(shù) 145
六、哺乳動物早期胚胎蛋白質(zhì)組學(xué)分析 147
七、代謝組學(xué)的胚胎質(zhì)量評估 149
八、多潛能基因表達檢測技術(shù) 150
第七節(jié) 胚胎體外生產(chǎn)與應(yīng)用技術(shù)體系 151
一、牛胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)體系 151
二、綿羊胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)體系 158
三、山羊胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)體系 162
參考文獻165
第四章 孤雌生殖與孤雄生殖 168
第一節(jié) 單性生殖的研究簡史 168
一、朱冼與他的單性繁殖研究168
二、哺乳動物的單性生殖研究169
第二節(jié) 孤雌激活與孤雌生殖 170
一、孤雌激活的機理 170
二、孤雌激活的方法 172
三、孤雌激活操作 174
四、卵母細胞孤雌激活的類型176
五、孤雌胚的發(fā)育 177
第三節(jié) 孤雄生殖 178
一、孤雄胚胎的制作方法 178
二、孤雄胚胎的發(fā)育 180
三、孤雄胚胎干細胞 181
四、單倍體胚胎干細胞181
參考文獻183
第五章 動物克隆技術(shù) 186
第一節(jié) 細胞核移植的研究簡史 187
一、細胞核移植技術(shù)設(shè)想的提出 187
二、無尾兩棲動物細胞核移植研究 188
三、魚類細胞核移植研究 189
四、哺乳類細胞核移植研究 190
五、異種動物的核移植 192
第二節(jié) 細胞核移植的基本程序192
一、供體細胞的選擇 192
二、受體胞質(zhì)的選擇 194
三、受體胞質(zhì)與供體核的細胞周期同步性 195
四、核移植操作 196
五、細胞融合198
六、克隆胚胎激活 200
七、克隆胚胎培養(yǎng) 203
八、克隆胚胎移植 204
九、克隆動物鑒定 204
第三節(jié) 小鼠體細胞核移植技術(shù)204
一、小鼠核移植操作的基本程序 204
二、顯微注射針的準備206
三、去核針或注核針的安裝及Piezo 調(diào)試 207
四、卵母細胞的收集 208
五、去核操作 209
六、供核體細胞的準備 210
七、供體核注射 210
八、融合胚的激活和培養(yǎng) 211
九、克隆胚胎的移植 213
第四節(jié) 牛體細胞核移植技術(shù) 213
一、卵母細胞的成熟培養(yǎng) 213
二、體細胞培養(yǎng)與供核體細胞的選擇215
三、去核操作 218
四、注核操作 219
五、融合 219
六、融合胚的激活 219
七、胚胎培養(yǎng)和囊胚質(zhì)量鑒定 221
八、囊胚的核型分析 221
九、胚胎移植和妊娠檢查 222
十、克隆牛生產(chǎn)與克隆犢牛護理 223
十一、克隆牛的繁殖與應(yīng)用 227
第五節(jié) 羊與其他動物的體細胞核移植技術(shù) 227
一、羊克隆技術(shù)要點 228
二、豬克隆技術(shù)要點 232
三、馬（或騾）克隆技術(shù)要點234
四、克隆動物研究進展236
第六節(jié) 影響體細胞核移植的因素 237
一、體細胞克隆存在的主要問題 237
二、影響克隆效率的因素 239
第七節(jié) 克隆動物的健康與食品安全性244
一、克隆動物的健康 244
二、克隆動物的行為 245
三、克隆動物的生態(tài)適應(yīng)性 246
四、克隆動物的食品安全 250
第八節(jié) 異種核移植 251
一、異種核移植的研究歷史 251
二、異種核移植胚胎基因組激活和基因表達 252
三、異種核移植胚胎線粒體異質(zhì)性 253
第九節(jié) 胚胎分割 254
一、胚胎分割方法 255
二、分割胚的發(fā)育 257
三、胚胎分割技術(shù)存在的問題 259
四、胚胎分割技術(shù)的意義 259
第十節(jié) 嵌合體制作技術(shù) 260
一、嵌合體研究的目的與意義 260
二、嵌合體的制作方法 260
三、嵌合體分析 264
四、嵌合體技術(shù)的意義 265
參考文獻 266
第六章 性別決定與性控技術(shù) 275
第一節(jié) 哺乳動物性別決定原理 276
一、性染色體上的性別決定基因 278
二、Sry 是TDF 的證據(jù)280
三、與睪丸決定有關(guān)的基因 282
四、與卵巢決定有關(guān)的基因 284
五、SRY 的作用及性腺細胞間的相互作用 286
六、動物性別決定模型 287
第二節(jié) 哺乳動物胚胎性別鑒定的傳統(tǒng)方法 288
一、細胞遺傳學(xué)方法 288
二、免疫學(xué)方法（H-Y 抗原法） 289
三、H-Y+精子與H-Y–精子的分離 290
四、X 染色體相關(guān)酶法鑒定胚胎性別 291
五、分子生物學(xué)方法 292
六、SRY-PCR法 293
七、其他方法294
第三節(jié) X 精子、Y 精子分離技術(shù) 295
一、分離精子的理論基礎(chǔ) 296
二、精液分離速度 298
三、分離精子準確率的評價方法 299
四、性控精液的產(chǎn)犢準確率 301
第四節(jié) 性控精液的應(yīng)用301
一、分離精子的人工輸精 302
二、性控精液的體外受精 302
三、性控精液在奶牛生產(chǎn)中的應(yīng)用 303
四、性控冷凍精液存在的問題 303
五、受精環(huán)境對哺乳動物性別形成的影響 304
參考文獻 306
第七章 配子與胚胎保存 311
第一節(jié) 胚胎的短期保存 311
一、異種動物體內(nèi)保存 312
二、胚胎的低溫保存 313
第二節(jié) 程序化超低溫冷凍保存技術(shù) 316
一、超低溫冷凍保存的原理 316
二、冷凍保護劑 318
三、冷凍保存的方法 320
四、冷凍保存的操作程序 321
五、冷凍胚胎解凍后的活力鑒定 325
六、程序化胚胎冷凍研究進展325
第三節(jié) 玻璃化冷凍保存技術(shù) 329
一、玻璃化冷凍保存的原理 329
二、玻璃化冷凍保存的操作要求 330
三、玻璃化冷凍方法 330
四、玻璃化冷凍保存具體操作 332
五、影響玻璃化冷凍效果的可能因素 334
六、玻璃化冷凍保存技術(shù)研究進展 336
第四節(jié) 卵母細胞的冷凍保存 338
一、卵母細胞的冷凍損傷 339
二、卵母細胞冷凍保存操作 341
三、卵母細胞冷凍保存進展與存在的問題 343
第五節(jié) 精液的冷凍保存345
一、精液的冷凍過程及其對精子的損傷 346
二、精液稀釋液中的添加劑 348
三、牛冷凍精液生產(chǎn)操作過程350
四、羊冷凍精液生產(chǎn)操作過程352
五、豬冷凍精液生產(chǎn)操作過程354
六、精液冷凍保存的發(fā)展趨勢356
參考文獻357
第八章 配子與胚胎發(fā)生的表觀遺傳學(xué) 363
第一節(jié) 表觀遺傳學(xué)原理364
一、DNA 甲基化與去甲基化 364
二、組蛋白修飾 367
三、染色質(zhì)重塑 372
四、假基因 378
五、非編碼RNA 379
第二節(jié) 配子發(fā)生過程中的表觀遺傳現(xiàn)象 382
一、PGC 分化過程存在廣泛的表觀遺傳修飾 382
二、雌雄生殖細胞印記的重建385
三、精母細胞減數(shù)分裂過程中的表觀遺傳修飾 386
四、卵母細胞減數(shù)分裂過程中的表觀遺傳修飾 387
五、DNA 羥甲基化修飾 389
第三節(jié) 胚胎發(fā)育過程中的表觀遺傳學(xué)修飾 390
一、胚胎早期發(fā)育過程中的基因組DNA 甲基化修飾 391
二、胚胎發(fā)育過程中的DNA 羥甲基化修飾 392
三、胚胎發(fā)育過程中的組蛋白修飾變化 393
四、克隆胚胎中的表觀遺傳修飾 396
五、異種核移植胚胎的核重塑 401
第四節(jié) 表觀遺傳系統(tǒng)的生物學(xué)意義 403
一、表觀遺傳學(xué)與疾病 403
二、環(huán)境對表觀遺傳學(xué)的影響 408
三、表觀遺傳學(xué)在動物繁殖領(lǐng)域的應(yīng)用前景 408
參考文獻 409
第九章 組學(xué)大數(shù)據(jù)解析生殖發(fā)育調(diào)控 416
第一節(jié) 大數(shù)據(jù)與生命科學(xué) 417
一、大數(shù)據(jù)時代 417
二、大數(shù)據(jù)處理算法和軟件 418
三、生物大數(shù)據(jù)的特征和應(yīng)用 419
四、大數(shù)據(jù)“干”實驗生物學(xué) 421
五、大數(shù)據(jù)生物學(xué)的發(fā)展趨勢 422
第二節(jié) 大數(shù)據(jù)生物信息技術(shù) 423
一、生物信息學(xué)的多學(xué)科本質(zhì) 423
二、生物信息技術(shù)的發(fā)展概況 424
第三節(jié) 大數(shù)據(jù)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析方法 426
一、系統(tǒng)生物學(xué)與模塊化調(diào)控 426
二、基因模塊聚類識別方法 428
第四節(jié) 組學(xué)技術(shù)概述 433
一、基因組測序技術(shù) 434
二、基因組研究策略 438
三、轉(zhuǎn)錄組技術(shù) 442
四、表觀遺傳組技術(shù) 444
五、蛋白質(zhì)組技術(shù) 446
六、單細胞測序技術(shù) 447
第五節(jié) 配子發(fā)生的組學(xué)研究 448
一、精子發(fā)生的組學(xué)研究 448
二、卵子發(fā)生的組學(xué)研究 450
三、胚胎內(nèi)生殖細胞遺傳圖譜解密 453
四、配子發(fā)生相關(guān)數(shù)據(jù)庫 454
第六節(jié) 哺乳動物胚胎發(fā)育多層次協(xié)同調(diào)控 454
一、關(guān)鍵基因表達模塊的精確化開啟是早期胚胎正常發(fā)育的關(guān)鍵455
二、非編碼RNA 調(diào)控早期胚胎發(fā)育 459
三、表觀遺傳修飾通過有序地開啟/關(guān)閉基因表達來調(diào)控早期胚胎發(fā)育462
四、染色質(zhì)DNA 空間局域構(gòu)象是關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因表達和表觀遺傳修飾基因組DNA 的充分條件 463
參考文獻464
第十章 動物的發(fā)情周期與同期發(fā)情 469
第一節(jié) 生殖激素 470
一、生殖激素的作用特點 470
二、主要的生殖激素 470
三、各生殖激素之間的相互關(guān)系 473
第二節(jié) 動物的發(fā)情周期與發(fā)情調(diào)控 473
一、家畜的發(fā)情周期 473
二、實驗動物的發(fā)情周期 474
三、動物季節(jié)性發(fā)情的調(diào)控 474
第三節(jié) 發(fā)情周期內(nèi)卵泡發(fā)育過程與發(fā)育模式 479
一、哺乳動物卵泡發(fā)育和卵子發(fā)生 479
二、卵泡發(fā)育和卵子發(fā)生有關(guān)的候選基因 481
第四節(jié) 誘導(dǎo)發(fā)情 482
一、發(fā)情調(diào)控理論 482
二、乏情期動物的誘導(dǎo)發(fā)情 483
三、催產(chǎn)素誘導(dǎo)發(fā)情 485
四、褪黑素誘導(dǎo)發(fā)情 486
第五節(jié) 同期發(fā)情 487
一、同期發(fā)情的原理 488
二、同期發(fā)情的藥物 488
三、同期發(fā)情方法 489
四、影響同期發(fā)情的因素 491
五、發(fā)情鑒定492
六、提高母畜繁殖率的措施 494
參考文獻494
第十一章 胚胎移植 496
第一節(jié) 胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)與基本原則 496
一、胚胎移植496
二、胚胎移植技術(shù)的生理學(xué)原理 498
三、胚胎移植的基本原則 500
四、胚胎移植的內(nèi)容 501
五、胚胎移植的意義 501
第二節(jié) 供體動物的超數(shù)排卵 502
一、供體選擇與飼養(yǎng)管理 502
二、超數(shù)排卵處理 503
三、超數(shù)排卵遇到的問題 507
第三節(jié) 人工授精與胚胎收集 509
一、母牛發(fā)情鑒定 509
二、人工授精技術(shù) 510
三、胚胎收集 511
四、揀胚技術(shù) 518
五、胚胎質(zhì)量分級 519
第四節(jié) 受體動物的同期發(fā)情處理 522
一、受體選擇 522
二、受體飼養(yǎng)管理 523
三、同期發(fā)情處理 523
第五節(jié) 胚胎移植的技術(shù)程序 524
一、手術(shù)法移植 525
二、非手術(shù)法移植 527
三、妊娠檢查 529
四、妊娠受體的飼養(yǎng)管理 529
第六節(jié) 影響胚胎移植成功率的因素 530
一、供體方面530
二、受體方面532
三、操作技術(shù)問題 533
參考文獻 534
第十二章 妊娠、分娩與產(chǎn)后母畜生殖調(diào)控 535
第一節(jié) 妊娠與圍產(chǎn)期飼養(yǎng)管理 535
一、妊娠期母畜的飼養(yǎng)管理 536
二、圍產(chǎn)期母畜的飼養(yǎng)管理 537
第二節(jié) 分娩調(diào)控 541
一、誘導(dǎo)分娩的意義 541
二、誘導(dǎo)分娩的原理 541
三、誘導(dǎo)分娩的方法 542
四、分娩助產(chǎn)543
第三節(jié) 哺乳母畜與初生幼畜的管理 545
一、哺乳母牛與初生犢牛的管理與護理 546
二、哺乳母羊與初生羔羊的管理與護理 547
三、產(chǎn)后母豬與仔豬的管理與護理 548
第四節(jié) 母畜產(chǎn)后生殖器官的生殖機能調(diào)控 549
一、影響子宮恢復(fù)的因素 549
二、牛產(chǎn)后子宮機能監(jiān)測 552
三、促進母牛產(chǎn)后子宮恢復(fù)的保健技術(shù) 554
參考文獻554
第十三章 胚胎干細胞 556
第一節(jié) 干細胞及其生物學(xué)特性557
一、干細胞 557
二、干細胞的生物學(xué)特性 557
三、干細胞的應(yīng)用 558
四、干細胞研究大事記 559
第二節(jié) 胚胎干細胞的獲取和基本特征 560
一、胚胎干細胞的獲取途徑 560
二、胚胎干細胞的研究現(xiàn)狀 563
三、胚胎干細胞的分子標記 566
四、胚胎干細胞的生物學(xué)特性 567
第三節(jié) 胚胎干細胞的分化能力 569
一、向生殖細胞的定向分化 570
二、向造血細胞的定向分化 571
三、向內(nèi)皮細胞的定向分化 571
四、向肝細胞的定向分化 572
五、向胰島細胞的定向分化 572
六、向心肌細胞的定向分化 572
七、向神經(jīng)細胞的定向分化 573
八、向其他細胞的定向分化 573
第四節(jié) 飼養(yǎng)層細胞的制備 574
一、飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)液 574
二、原代胎兒成纖維細胞的制備 574
三、細胞傳代和冷凍保存 575
四、細胞解凍和培養(yǎng) 576
五、飼養(yǎng)層的制備 576
第五節(jié) 小鼠胚胎干細胞的分離和培養(yǎng)576
一、小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)液 577
二、小鼠胚胎干細胞的分離和培養(yǎng) 577
三、小鼠胚胎干細胞的鑒定 578
第六節(jié) 大鼠胚胎干細胞的分離與培養(yǎng) 583
一、小鼠與大鼠胚胎干細胞多能性信號通路 583
二、大鼠3i 胚胎干細胞培養(yǎng)體系 584
三、具有種系嵌合能力的大鼠胚胎干細胞培養(yǎng)體系 585
四、大鼠干細胞的轉(zhuǎn)基因模型應(yīng)用 588
第七節(jié) 人胚胎干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定 589
一、人組織的飼養(yǎng)層細胞制備 589
二、胚胎干細胞的分離與培養(yǎng) 590
三、hES 細胞的生物學(xué)鑒定 593
四、無血清無飼養(yǎng)層細胞的干細胞培養(yǎng)體系 595
第八節(jié) 胚胎干細胞的應(yīng)用及存在問題 597
一、ES 細胞的應(yīng)用研究現(xiàn)狀 597
二、存在的問題 599
參考文獻 600
第十四章 組織干細胞 607
第一節(jié) 間充質(zhì)干細胞 609
一、骨髓間充質(zhì)干細胞 609
二、骨髓間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng) 612
三、間充質(zhì)干細胞的應(yīng)用 616
第二節(jié) 肌肉衛(wèi)星細胞 617
一、肌肉衛(wèi)星細胞的分離 617
二、肌肉衛(wèi)星細胞的鑒定 619
三、肌肉衛(wèi)星細胞的誘導(dǎo)分化 619
四、肌肉衛(wèi)星細胞的發(fā)展趨勢 623
第三節(jié) 其他組織干細胞 624
一、脂肪干細胞 624
二、臍帶血干細胞 628
三、羊水干細胞 630
四、毛囊干細胞 632
五、肝干細胞 635
六、胰腺干細胞 637
七、組織干細胞的發(fā)展趨勢 639
參考文獻 643
第十五章 精原干細胞 647
第一節(jié) 精原干細胞的來源 647
一、精原干細胞的發(fā)生 647
二、精原干細胞的特征 648
三、SSC 的分子標記及純化 649
四、SSC 微環(huán)境 651
第二節(jié) 精原干細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定 653
一、小鼠精原干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定 653
二、綿羊精原干細胞的分離 655
三、山羊精原干細胞的培養(yǎng)與鑒定 657
四、牛精原干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定 662
第三節(jié) 精原干細胞自我更新的調(diào)控機制 665
一、影響精原干細胞自我更新的相關(guān)因子 665
二、影響精原干細胞自我更新的相關(guān)基因 666
三、影響精原干細胞自我更新的相關(guān)小RNA 668
四、影響精原干細胞自我更新的相關(guān)通路 669
五、表觀遺傳修飾對精原干細胞自我更新的影響 671
參考文獻 671
第十六章 誘導(dǎo)干細胞 678
第一節(jié) 誘導(dǎo)干細胞的產(chǎn)生 679
一、細胞重編程的方法 679
二、誘導(dǎo)干細胞技術(shù) 680
三、重編程轉(zhuǎn)錄因子 681
第二節(jié) 誘導(dǎo)多能干細胞研究進展 683
一、iPS 細胞的特性愈加接近胚胎干細胞 683
二、iPS 細胞誘導(dǎo)效率的提升 684
三、iPS 細胞誘導(dǎo)的生物安全性 686
四、體細胞誘導(dǎo)重編程的分子機制 689
五、家畜誘導(dǎo)多能干細胞研究概況 694
六、多能干細胞的狀態(tài) 696
第三節(jié) 小鼠誘導(dǎo)多能干細胞的制備 701
一、培養(yǎng)液、試劑及小鼠 701
二、iPS 細胞的誘導(dǎo) 702
三、iPS 細胞的多能性分析 705
第四節(jié) 人誘導(dǎo)多能干細胞的制備 707
一、細胞培養(yǎng)液 707
二、需要的細胞株和載體 708
三、人誘導(dǎo)多能干細胞的制備方法 708
四、人iPS 細胞的鑒定 710
第五節(jié) 豬誘導(dǎo)多能干細胞的制備 711
一、試劑與材料 711
二、豬誘導(dǎo)多能干細胞的制備方法 713
三、豬iPS 細胞的鑒定 714
第六節(jié) 牛誘導(dǎo)多能干細胞的制備 715
一、牛羊膜來源誘導(dǎo)多能干細胞的制備 715
二、biPS 細胞的鑒定 717
第七節(jié) 誘導(dǎo)多能干細胞的應(yīng)用及存在問題 719
一、誘導(dǎo)多能干細胞的應(yīng)用 719
二、iPS 技術(shù)存在的問題 721
三、干細胞技術(shù)成為第三次醫(yī)學(xué)革命的主導(dǎo)技術(shù) 722
參考文獻 723
第十七章 基因編輯技術(shù) 730
第一節(jié) 基于同源重組的基因打靶技術(shù) 731
一、基因打靶技術(shù)簡介 731
二、基因打靶技術(shù)流程 731
三、應(yīng)用與優(yōu)缺點 734
第二節(jié) 鋅指核酸酶（ZFN）技術(shù) 734
一、ZFN 技術(shù)簡介 734
二、ZFN 技術(shù)流程 735
三、ZFN 技術(shù)發(fā)展應(yīng)用及特點 737
第三節(jié) 類轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)物核酸酶（TALEN）技術(shù)738
一、TALEN 技術(shù)簡介 738
二、TALEN 技術(shù)流程 739
三、TALEN 技術(shù)應(yīng)用及特點 743
第四節(jié) CRISPR/Cas9 技術(shù) 744
一、CRISPR/Cas9 技術(shù)簡介 744
二、CRISPR/Cas9 技術(shù)流程 744
三、CRISPR/Cas9 技術(shù)的優(yōu)化 746
第五節(jié) 基因組編輯技術(shù)的比較和應(yīng)用 747
一、不同基因編輯技術(shù)的比較 747
二、基因組編輯技術(shù)的應(yīng)用進展 748
參考文獻753
第十八章 轉(zhuǎn)基因小鼠制備技術(shù) 757
第一節(jié) 小鼠的生物學(xué)特性與飼養(yǎng)管理758
一、小鼠的行為習性 758
二、小鼠的生理學(xué)特點758
三、小鼠的飼養(yǎng)管理 759
第二節(jié) 小鼠及其他實驗動物的品系 760
一、小鼠的近交系 760
二、常用小鼠近交品系特征及用途簡介 762
三、常用小鼠封閉群 768
四、常用雜交一代小鼠 769
五、大鼠近交品系特征及用途772
六、實驗兔品種 778
七、實驗犬品種 780
八、實驗豬品種 781
第三節(jié) 小鼠超數(shù)排卵與輸精管結(jié)扎手術(shù) 783
一、小鼠的交配與超數(shù)排卵 783
二、輸精管結(jié)扎術(shù) 786
第四節(jié) 原核注射技術(shù) 788
一、顯微注射DNA 的準備 789
二、液體配制 791
三、小鼠受精卵的收集 794
四、顯微操作系統(tǒng)及注射針 795
五、原核的顯微注射 798
六、胚胎培養(yǎng) 799
第五節(jié) 胚胎移植與轉(zhuǎn)基因鑒定 799
一、假孕母鼠的準備 799
二、輸卵管移植 800
三、子宮內(nèi)移植 801
四、轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定 802
五、純合子小鼠的培育 803
第六節(jié) 原核注射制備轉(zhuǎn)基因小鼠的技術(shù)優(yōu)化 804
一、質(zhì)粒準備 804
二、注射針的直徑對轉(zhuǎn)基因小鼠效率的影響 804
三、注射的外源DNA 濃度對轉(zhuǎn)基因小鼠效率的影響 804
四、單或雙原核注射對轉(zhuǎn)基因小鼠陽性率的影響 805
五、母鼠的假孕時間對轉(zhuǎn)基因小鼠生產(chǎn)的影響 806
六、其他一些影響因素 806
參考文獻 807
第十九章 家畜轉(zhuǎn)基因技術(shù) 809
第一節(jié) 動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展簡史 810
一、研究簡史 810
二、生物轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展的主要事件 812
三、動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展的主要事件 813
第二節(jié) 目的基因的操作 814
一、基因分離 814
二、利用PCR 技術(shù)擴增目的基因 816
三、DNA 重組 816
第三節(jié) 動物轉(zhuǎn)基因操作技術(shù) 820
一、原核注射法 820
二、病毒載體法 821
三、精原干細胞法 822
四、精子載體法 823
五、人工酵母染色體法 824
六、體細胞克隆法 825
七、RNA 干擾 825
第四節(jié) 家畜轉(zhuǎn)基因研究概況 826
一、轉(zhuǎn)基因豬研究 827
二、轉(zhuǎn)基因牛研究 833
三、轉(zhuǎn)基因羊研究 839
四、轉(zhuǎn)基因家畜存在的主要問題 842
第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物的生物安全843
一、轉(zhuǎn)基因動物的生物安全 844
二、轉(zhuǎn)基因動物的食品安全 846
三、轉(zhuǎn)基因動物的安全評價 849
參考文獻857
第二十章 人類輔助生殖技術(shù) 863
第一節(jié) 人類輔助生殖技術(shù)的歷史和發(fā)展 865
一、世界人類輔助生殖技術(shù)發(fā)展簡史865
二、我國人類輔助生殖技術(shù)發(fā)展歷史 867
三、人類輔助生殖技術(shù)的主要內(nèi)容 868
第二節(jié) 人類輔助生殖中的促排原理及配子操作技術(shù) 873
一、控制性超促排卵 873
二、卵母細胞的采集與培養(yǎng) 875
三、精液的采集及處理 875
四、人類體外受精操作流程 878
第三節(jié) 人類輔助生殖技術(shù)中的受精操作及胚胎培養(yǎng) 878
一、IVF 適應(yīng)證及操作方法 878
二、ICSI 適應(yīng)證及操作方法 879
三、胚胎的體外培養(yǎng)及評分 883
四、精子、卵子及胚胎的冷凍 886
五、胚胎移植 889
第四節(jié) 胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù) 890
一、胚胎植入前遺傳學(xué)活檢技術(shù)概述 890
二、胚胎植入前遺傳學(xué)診斷的技術(shù)方法 891
第五節(jié) ART 相關(guān)衍生技術(shù)的發(fā)展 895
一、經(jīng)形態(tài)學(xué)選擇后的卵胞質(zhì)內(nèi)單精注射 896
二、卵子輔助激活技術(shù) 896
三、實時胚胎發(fā)育監(jiān)測分析培養(yǎng)系統(tǒng) 897
四、非侵入性胚胎分級體系 897
五、卵母細胞老化與IVF-ET 結(jié)局 898
六、卵子胞質(zhì)成熟及其對IVF-ET 結(jié)局的影響 899
七、卵子線粒體功能紊亂與卵子老化900
八、臨床醫(yī)學(xué)對扭轉(zhuǎn)卵子老化采取的一些措施 900
第六節(jié) 輔助生殖技術(shù)的子代健康分析 901
一、不同輔助生殖技術(shù)的特點 902
二、ART 子代的安全性與健康 903
三、ART 子代的基因?qū)W研究 907
四、ART 對孕婦的影響 909
五、人類輔助生殖技術(shù)的社會與倫理問題 910
參考文獻 911
索引 917